Un espectrofluorómetro es un instrumento óptico especializado que se utiliza para medir los espectros de emisión de fluorescencia de muestras excitándolas con longitudes de onda de luz seleccionadas y detectando la radiación emitida resultante, generalmente en un ángulo de 90 grados para minimizar la interferencia de luz dispersa.[1] Permite el análisis de propiedades de fluorescencia molecular, como intensidad, distribución de longitud de onda y rendimiento cuántico, proporcionando datos espectrales detallados para evaluaciones cualitativas y cuantitativas.[2]

El funcionamiento de un espectrofluorómetro se basa en los principios de la fluorescencia, un proceso de fotoluminiscencia en el que las moléculas absorben fotones (generalmente en el rango ultravioleta o visible) para alcanzar un estado electrónico excitado, seguido de una relajación al estado fundamental con la emisión de fotones de menor energía en longitudes de onda más largas, conocido como cambio de Stokes.[3] Esta excitación y emisión selectivas permiten una alta sensibilidad, detectando a menudo concentraciones tan bajas como 10^{-9} a 10^{-12} M, lo que la hace superior a las técnicas basadas en absorción para el análisis de trazas.[2] Los componentes clave incluyen una fuente de luz de amplio espectro, como una lámpara de arco de xenón o una lámpara de vapor de mercurio, para generar luz de excitación; monocromadores de excitación y emisión con rejillas de difracción para selección de longitud de onda; un compartimento para muestras que alberga cubetas de cuarzo para contener soluciones diluidas; y un detector, normalmente un tubo fotomultiplicador (PMT), para convertir los fotones emitidos en señales eléctricas para el registro espectral.[1] A diferencia de los fluorómetros básicos, que utilizan filtros para mediciones de longitud de onda fija, los espectrofluorómetros brindan capacidades de escaneo para generar matrices completas de excitación-emisión, lo que mejora su versatilidad.[2]